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考慮色譜分離柱效時(shí),要注意哪些問(wèn)題
點(diǎn)擊次數(shù):1194 更新時(shí)間:2022-06-17
  色譜分離柱在使用前,更好進(jìn)行柱的性能測(cè)試,并將結(jié)果保存起來(lái),作為今后評(píng)價(jià)柱性能變化的參考。但要注意:柱性能可能由于所使用的樣品、流動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同;另外,在做柱性能測(cè)試時(shí)是按照色譜分離柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行(出廠測(cè)試所使用的條件是更佳條件),只有這樣,測(cè)得的結(jié)果才有可比性。
 
  有效的辦法是純化樣品。我們?cè)诙嗄甑姆治龉ぷ髦邪l(fā)現(xiàn),凡是樣品純化的越干凈,分離柱的壽命就越長(zhǎng);反之,只有提取沒(méi)有純化的樣品,分離柱柱效下降較快。建立一個(gè)理想的色譜分析方法應(yīng)該有一套有效的樣品前處理方法,特別是在分析血漿和尿液樣品時(shí),要特別注意樣品的提取與純化,盡量使處理過(guò)的樣品中雜質(zhì)降到較低,保護(hù)柱頭和柱子。
 
  提取純化好的樣品最好用流動(dòng)相來(lái)溶解,一方面減少色譜圖中的溶劑峰干擾,另一方面也是檢查樣品在流動(dòng)相中的溶解性,如果樣品進(jìn)樣后在流動(dòng)相中沉淀,會(huì)堵塞進(jìn)樣器和柱頭,甚至樣品分解,出現(xiàn)怪峰。如果出現(xiàn)樣品與流動(dòng)相不溶要設(shè)法改變?nèi)芙鈼l件,如更換樣品溶劑,或改進(jìn)處理樣品的方法,或過(guò)濾,去除不溶性物質(zhì)。
 
  在考慮色譜分離柱效時(shí),需要特別注意以下幾個(gè)問(wèn)題。
 
  一、決定組分保留值的分配系數(shù):分配系數(shù)K=溶質(zhì)在固定相中的濃度/溶質(zhì)在流動(dòng)相中的濃度。K值小的組分在固定相中濃度小,所以容易隨流動(dòng)相運(yùn)動(dòng)而較早出峰,反則反之。
 
  二、決定組分保留值的分配比(容量因子):容量因子=組分在固定相中的量/組分在流動(dòng)相中的量。
 
  三、選擇性因子α:即后出峰的組分的調(diào)整保留時(shí)間與先出峰的組分的調(diào)整保留時(shí)間的比值。
 
  因?yàn)榻M分在色譜分離柱內(nèi)移動(dòng)時(shí),會(huì)逐步產(chǎn)生擴(kuò)散,不利于分離,影響色譜分離柱的分離效率,所以塔板數(shù)高者好。使用過(guò)程中,當(dāng)塔板數(shù)降到一定程度時(shí)該柱就報(bào)廢了。