說說色譜分離柱再生的兩種方法
點擊次數(shù):3584 更新時間:2019-10-29
色譜分離柱長時間使用后,造成柱入口樹脂損失,使死體積增大,分離度降低;長時間未使用的色譜分離柱樹脂床進入空氣會使樹脂產(chǎn)生溝流,造成分離度降低,同時造成離子色譜峰分叉。這些現(xiàn)象均造成定量結(jié)果的誤差。因此,離子色譜峰形一旦有變化,就要重新繪制標準曲線。
色譜分離柱是指離子交換色譜中的固定相中的一些帶電荷的基團,這些帶電基團通過靜電相互作用與帶相反電荷的離子結(jié)合。如果流動相中存在其他帶相反電荷的離子,按照質(zhì)量作用定律,這些離子將與結(jié)合在固定相上的反離子進行交換。
色譜分離柱是蛋白純化技術(shù)中常用的一種純化方法,其原理是指被分離物質(zhì)所帶的電荷可與離子交換劑所帶的相反電荷結(jié)合,這種帶電分子與固定相之間的結(jié)合作用是可逆的,在改變pH或者用逐漸增加離子強度的緩沖液洗脫時,離子交換劑上結(jié)合的物質(zhì)可與洗脫液中的離子發(fā)生交換而被洗脫到溶液中。由于不同物質(zhì)的電荷不同,其與離子交換劑的結(jié)合能力也不同,所以被洗脫到溶液中的順序也不同,從而被分離出來。
色譜分離柱的再生方法有兩種:
?。?)先用25ml蒸餾水通過柱子以除去緩沖鹽類,再用25ml甲醇沖洗,以除去由于分配效應(yīng)而殘存在骨架中的雜質(zhì),再用25ml蒸餾水除去不溶于甲醇的殘存鹽類,后用緩沖液平衡。
?。?)先用0.1mol/L的檸檬酸洗滌,然后用水洗滌(不要用堿性溶液,以防硅膠基質(zhì)溶解),后用緩沖液平衡。